突变阻滞扩增系统(amplification refractory mutation system,ARMS-PCR),又名等位基因特异PCR(allele specific PCR,AS-PCR)。
ARMS原理基于Taq DNA聚合酶缺乏3′→5’外切校正活性的特点,在等位基因特异性延伸反应基础上,只有当等位基因特异性引物的3’末端碱基与待检测位点碱基互补时,才能进行延伸反应,从而将有点突变样本与正常基因型样本区分开来。用于检测已知突变的ARMS技术在肿瘤的个体化分子检测、基因突变和SNP位点检测中已被广泛运用,成为国际上肿瘤个体化分子检测最重要、先进的技术之一,其在临床应用中的优势已被业内广泛认可。
基于突变阻滞扩增原理,威尼斯人开发了同时兼顾扩增性能和错配识别能力的用于ARMS分型技术的qPCR预混液Robustart ARMS Gene-typing Premix-UNG (Probe qPCR),能够有效进行基于ARMS-PCR技术的分子检测、基因突变和SNP位点检测。
一、与市场同类产品对比测试
测试方法:使用EGFR T790M野生型引物和突变型引物,分别扩增1E5 copies/mL野生型质粒模板和等拷贝数突变型质粒模板。
EGFR T790M体系
二、人口腔拭子样本ARMS分型测试
实验条件:
口腔拭子:用拭子刷取口腔内壁5-10次后,于1000μL TE Buffer 中洗涤拭子,2500rpm离心10min,弃上清,剩余约100μL,吹打混匀,取样5μL加入反应体系进行扩增。
样本A(CYP2C19*2野生型,CYP2C19*3野生型,CYP2C19*17杂合型)
样本B(CYP2C19*2野生型,CYP2C19*3野生型,CYP2C19*17野生型)
结论:威尼斯人M2281试剂用于人口腔拭子样本CYP2C19基因多态性检测,可成功区分各基因的基因型,扩增性能强且错配识别性能显著优于市场同类产品。
三、人全血提取DNA样本ARMS分型检测
实验条件:
人全血提取:使用威尼斯人MagBio Blood DNA/RNA Kit II(磁珠法全血核酸提取试剂盒II)进行人全血提取,200μL全血样本经过提取后洗脱得到85μL核酸提取样本,取样5μL加入反应体系进行扩增。
测试方法:使用CYP2C19野生型引物和突变型引物、探针分别扩增人全血提取核酸样本,检测CYP2C19基因多态性,包括等位基因CYP2C19*2 (rs4244285, c.681G>A)、CYP2C19*3 (rs4986893, c.636G>A)和CYP2C19*17 (rs12248560, c.-806C>T)。
结论:威尼斯人M2281试剂用于人全血提取核酸样本的CYP2C19基因多态性检测,可成功区分各基因的基因型,扩增性能强且错配识别性能显著优于市场同类产品。
01
肿瘤的个体化分子检测、基因突变和SNP位点检测。
02
遗传病筛查、疾病易感基因检测。
03
农牧业配种、动植物检验检疫。
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